選擇生長健康、無病害的白菜植株。70%乙醇、次氯酸鈉等,用於表麵消毒植物材料。
製備白菜的愈傷組織原生質體通常涉及一係列步驟,主要包括表麵消毒、愈傷組織的培養和酶解等過程。以下是一個一般的操作流程:
材料準備:
1. 白菜胚體:
選擇生長健康、無病害的白菜植株。
2. 表麵消毒劑:
70%乙醇、次氯酸鈉等,用於表麵消毒植物材料。
3. 培養基:
含有植物生長激素的培養基,如Murashige and Skoog培養基(MS培養基)。
4. 愈傷組織培養條件:
具體培養條件根據實驗設計和白菜品種而定。
5. 酶液:
植物酶解酶、纖維素酶等,用於酶解植物細胞壁,釋放原生質體。
6. 實驗室用具:
顯微鏡、吸管、移液器、培養皿、濾紙等。
步驟:
1. 表麵消毒:
將白菜胚體在流動水下清洗,去除表麵的塵土。
將白菜胚體浸泡在70%乙醇或次氯酸鈉等表麵消毒劑中,進行表麵消毒。消毒時間通常在幾分鍾到十幾分鍾之間,具體取決於消毒劑的濃度和植物材料的特性。
2. 剪切和培養:
將表麵消毒後的白菜胚體剪成小段。
將這些小段培養在含有植物生長激素的培養基中,提供適當的溫度和光照條件。培養時間根據實驗設計和研究目的而定,通常是數天到數周。
3. 收獲愈傷組織:
當愈傷組織形成並達到適當的大小時,收獲愈傷組織用於後續的實驗。
4. 酶解和原生質體製備:
將收獲的愈傷組織放入含有植物酶解酶、纖維素酶等的酶液中,進行酶解。酶解時間和溫度根據實驗需求而定,通常需要在無菌條件下進行操作。
過濾酶解後的混合物,獲取含有原生質體的懸浮液。
5. 培養原生質體:
將原生質體懸浮液接種到含有植物生長激素的培養基中,提供適當的生長條件。
這是一個一般性的步驟概述,具體的實驗條件和步驟可能因實驗目的、植物品種和培養條件的不同而有所不同。在進行實驗之前,請確保閱讀相關的文獻和方法論,以了解適用於您研究的特定條件。同時,進行實驗時,嚴格遵循無菌技術,以防止外部微生物的汙染。