選擇生長健康、無病害的白菜植株。例如,70%乙醇、次氯酸鈉(NaClO)等。
進行表麵消毒是製備植物原生質體的重要步驟,以防止外部微生物的汙染。以下是一般用於白菜原生質體的表麵消毒步驟:
材料準備:
1. 白菜組織:
選擇生長健康、無病害的白菜植株。
2. 表麵消毒劑:
例如,70%乙醇、次氯酸鈉(NaClO)等。
3. 培養基:
含有植物生長激素的培養基,如Murashige and Skoog培養基(MS培養基)。
4. 實驗室用具:
罐子或培養皿、無菌工具(剪刀、鑷子等)、濾紙、吸管等。
步驟:
1. 準備表麵消毒劑:
預先準備適當濃度的表麵消毒劑,例如使用70%乙醇或次氯酸鈉。濃度和消毒時間需要根據實驗設計和植物材料的特性來確定。
2. 準備白菜組織:
從白菜植株中剪下需要的部分,例如莖尖、側芽等,這些部分通常富含分裂活躍的細胞。
3. 表麵消毒:
將白菜組織在流水下衝洗,去除表麵的塵土。
將白菜組織浸泡在表麵消毒劑中,確保每個部分充分浸泡。消毒的時間通常在幾分鍾到十幾分鍾之間,具體取決於使用的消毒劑和植物材料的特性。
4. 洗滌:
用無菌蒸餾水或含有抗氧化劑的水對消毒後的組織進行多次洗滌,以去除殘留的消毒劑。
5. 分離組織:
使用無菌工具,如剪刀或鑷子,將表麵消毒後的白菜組織分割成小段。這些小段可以用於後續的酶解步驟,釋放原生質體。
6. 無菌操作:
在整個操作過程中,保持無菌條件,避免外部微生物的汙染。
完成這些步驟後,您就可以將表麵消毒過的白菜組織用於原生質體的製備,接下來的步驟可能涉及酶解、過濾和培養等。在進行實驗之前,請確保閱讀相關的文獻和方法,以了解適用於您研究的特定條件。